雙色熒光觀察是一種通過同時檢測兩種不同波長的熒光信號，對生物樣本進(jìn)行多參數(shù)分析的技術(shù)。該技術(shù)在細(xì)胞動態(tài)追蹤、蛋白質(zhì)相互作用研究等領(lǐng)域具有重要意義。

西格瑪光機(jī)通過其分光鏡、濾光片觀察套件及同軸照明觀察系統(tǒng)，為雙色熒光觀察提供了高精度解決方案。

一、雙色熒光觀察的原理

雙色熒光觀察的核心在于分離不同波長的激發(fā)光與發(fā)射光。其流程包括：

激發(fā)階段：使用特定波長的激發(fā)光（如488nm和561nm）分別激發(fā)樣本中的兩種熒光探針。

分光與過濾：通過分光鏡將混合的熒光信號按波長分離，再經(jīng)發(fā)射濾光片進(jìn)一步純化信號，避免交叉干擾。

同步成像：分離后的信號由相機(jī)同步捕獲，生成雙通道圖像，用于后續(xù)疊加分析。

二、西格瑪光機(jī)的關(guān)鍵技術(shù)組件

分光鏡

西格瑪光機(jī)提供多種分光鏡，包括偏光分光鏡（PBS）、非偏光分光鏡（NPCH）和多層電介質(zhì)膜立方體分光鏡（CSM）等，分別適用于不同實(shí)驗條件。

偏光平板分光鏡（PBS）

非偏光立方體半反射鏡（NPCH）

多層電介質(zhì)膜立方體分光鏡（CSM）

熒光濾光片套件

西格瑪光機(jī)的熒光觀察濾光片套件（高畫質(zhì)圖像）包含激發(fā)光用濾光片(Ex）、吸收濾光片（Em）和分光鏡(DM），能精確匹配熒光探針的激發(fā)/發(fā)射波長，減少背景噪聲，提升信噪比。例如，在雙色實(shí)驗中，濾光片組可分別篩選出兩種探針的特定信號。

同軸照明觀察系統(tǒng)

西格瑪?shù)耐S照明觀察系統(tǒng)支持高倍率觀察，并可通過C型接口連接攝像頭，適配多波長光源和分光組件，便于集成雙色成像模塊。

三、應(yīng)用案例：

斑馬魚雙色成像研究

在斑馬魚發(fā)育研究中，雙色熒光技術(shù)被用于同時標(biāo)記不同細(xì)胞類型。

例如，北京大學(xué)的研究團(tuán)隊曾搭建雙光子光片成像系統(tǒng)，采用雙色分光器（如濱松W-View Gemini）同步捕獲紅色（標(biāo)記紅細(xì)胞）與綠色（標(biāo)記胰島細(xì)胞）熒光信號。

細(xì)胞動態(tài)追蹤實(shí)驗

在活細(xì)胞雙色成像中，研究人員可通過西格瑪光機(jī)的立方體分光鏡（CSMH）和濾光片套件，同步捕獲綠色（如GFP，發(fā)射波段500-550nm）與紅色熒光（如mCherry，發(fā)射波段600-650nm）。該系統(tǒng)兼容激光光源與LED光源，支持長時間動態(tài)觀察。

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